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遠慕Elisa的測試步驟您做對了嗎?
點擊次數(shù):1444 更新時間:2015-12-28

    遠慕Elisa的測試步驟您做對了嗎?

    ELISA測定有很多步驟,稍有一步差錯,就容易導致實驗失敗,那么您平時所做的測試步驟都對了嗎??纯从蛇h慕生物分析的測試步驟,咋們一一對比吧!

    各種類型ELISA測定時一般需經(jīng)過以下步驟:固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結果。ELISA操作較繁雜,操作不當將引起較大的誤差。在操作中應注意以下5個方面。

    1.隨著病情的進展或由其他因素影響,某些抗體在機體內的含量發(fā)生大幅波動,因此有必要對標本進行預處理,例如對血清標本作適當稀釋,或離心分離血脂等。間接法測定中,標本適當稀釋還可降低非特異性反應。

    2.加樣一般使用加液器,在ELISA中一般有4次加樣:加標本、加酶結合物、加底物和加終止液。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴,以免交叉污染。加酶結合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴。

    3.在成批手工檢測中,還應注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異,使抗原抗體反應和酶促反應時間不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,不注意可能會導致錯誤結果或定量不準。

    4.洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關鍵步驟。目的是除去未結合的免疫反應物,終止抗原抗體反應,除去標本中與反應無關的成分、游離的酶標物以及反應過程中吸附于固相載體上的非特異性物質??捎孟窗鍣C洗板或手工洗板,前者洗滌質量較好,各反應孔洗滌效果均一,批內、批間差異小,手工洗板應注意控制各孔洗滌效果,差異不宜太大。

    5.準確判定結果須使用ELISA測讀儀(酶標儀),比色法判讀可選擇單波長或雙波長,根據(jù)反應液顏色的不同選用不同波長的濾光片,以空白孔校零測定反應孔的吸光度值(A值)。酶標儀具有良好的重復性。

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