免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常會(huì)出現(xiàn)高背景值，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的檢測(cè)。這是因?yàn)樵谑褂孟嚓P(guān)免疫學(xué)試劑時(shí)，蛋白與未吸附的固體載相結(jié)合，發(fā)生非特異性結(jié)合造成的。免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中常通過封閉試劑來封閉這樣的固相載體部位，以減少或消除非特異性結(jié)合背景的影響。

    常見的封閉劑包括脫脂奶粉、牛血清白蛋白BSA、動(dòng)物血清和Fab片段單鏈二抗。因?yàn)槟谭壑锌赡艽嬖谔烊坏纳锼亍A性磷酸酶，不適合用于磷酸化蛋白檢測(cè)的封閉以及使用生物素和堿性磷酸酶系統(tǒng)的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。另外，脫脂奶粉中可能含有牛IgG，能夠與抗牛、山羊、綿羊、馬等二抗有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)，會(huì)造成一定的背景。相較于其他封閉劑，脫脂牛奶作為封閉劑的應(yīng)用范圍較窄。艾美捷為您提供全面的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)封閉劑。

    免疫學(xué)試驗(yàn)中常通過封閉試劑來封閉未吸附蛋白的固相載體部位，以減少非特異性結(jié)合背景的影響。比如ELISA 試驗(yàn)中繼包被之后用0.05-0.5% BSA 等溶液來占據(jù)未能被包被的空隙；又如WB 試驗(yàn)中常用5% 脫脂奶粉或者BSA 封閉膜上除轉(zhuǎn)印蛋白占據(jù)的其它部位。除了用于封閉未吸附蛋白的固相載體，封閉試劑也被廣泛用于封閉其它非特異性結(jié)合。如ELISA 實(shí)驗(yàn)中，特異性抗體與血清樣本中IgM、IgG 型類風(fēng)濕因子以及補(bǔ)體等組分產(chǎn)生非特異性結(jié)合；IHC、IF 等試驗(yàn)中，特異性抗體與樣本中Fc 受體的結(jié)合，以及在IHC 和IF 雙染或三染實(shí)驗(yàn)中，驢血清也被廣泛用于封閉試劑以減少抗體之間的非特異性結(jié)合；另外，F(xiàn)ab 片段單鏈二抗也被用于熒光雙染中的有效封閉。

    牛血清白蛋白BSA

    BSA是wei常見的封閉試劑，與脫脂奶粉相比，BSA組分相對(duì)單一，適用于ELISA實(shí)驗(yàn)，生物素、堿性磷酸酶系統(tǒng)的免疫學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)或者其他對(duì)特異性要求較高的實(shí)驗(yàn)。值得注意的是，普通級(jí)別的BSA中也可能存在牛IgG，因此與能夠與抗牛、山羊、綿羊、馬等二抗有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)，會(huì)造成一定的背景，建議使用不含IgG的BSA產(chǎn)品。

    動(dòng)物血清serum

    封閉用血清來源選擇應(yīng)與二抗為相同種屬來源作為封閉劑。封閉血清的主要原理：1.待檢樣本會(huì)非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致背景過高。這點(diǎn)與BSA原理相同。2.待檢樣本中可能會(huì)有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，而因?yàn)榉忾]血清中含有抗體，因此用血清可以封閉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。這是BSA無法滿足的。需要注意的是，某些封閉血清內(nèi)可能會(huì)含有疊dan化鈉，因此不適用于HRP酶標(biāo)的免疫學(xué)檢測(cè)體系。

    Fab片段單鏈二抗

    由于二價(jià)的抗體（全I(xiàn)gG或F（ab’）2片段）有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，不能用來封閉。而Fab片段單鏈二抗只有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，因此可*封閉免疫球蛋白。例如，在兩個(gè)單抗的雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，可用于封閉樣本表面的免疫球蛋白，也可用于封閉組織切片或細(xì)胞表面的內(nèi)源性免疫球蛋白。Fab片段二抗非常適合封閉IgG、IgM等免疫球蛋白。一般用于血清封閉后使用10-20ug/ml濃度的Fab抗體，可有效封閉內(nèi)源性IgG蛋白。此外，巧妙地使用Fab片段單價(jià)二抗可解決IF雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，兩個(gè)一抗來自同一種屬的麻煩。