在培養(yǎng)細胞時，人們常常關(guān)注細菌和真菌的污染，認為它們是細胞培養(yǎng)的主要干擾因素。但其實，更嚴(yán)重的是支原體 的感染，它的發(fā)生率非常高，而且不易被發(fā)現(xiàn)。遠慕生物為您分析污染細胞的支原體從哪里來。

不僅普通光鏡下無法發(fā)現(xiàn)支原體，而且培養(yǎng)基也不容易變色。但支原體對細胞的各種干擾卻是不容忽視的。它不僅導(dǎo)致細胞狀態(tài)不佳，生長速度慢，而且會使細胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變，嚴(yán)重影響實驗結(jié)果。因此，在預(yù)防和治療支原體污染之前，有必要去了解細胞被支原體污染的可能途徑。

支原體可以通過頂部的細胞器特異性和宿主細胞結(jié)合。這些頂部的細胞器含有高濃度的粘附蛋白，可粘附到真核細胞并穿入到細胞內(nèi)部。支原體缺乏細胞壁，它們的胞膜可和宿主的細胞膜融合并交換其胞膜和胞漿成分。

支原體污染的頻率和污染來源

細胞培養(yǎng)中有幾種支原體污染與人、牛和豬有關(guān)。實驗室的工作人員是口腔支原體、發(fā)酵支原體和人型支原體的主要來源。這三種支原體占細胞培養(yǎng)中支原體污染的一半以上，它們主要存在于人的口咽部。精氨酸支原體和無膽甾原體是另兩類細胞培養(yǎng)中的支原體，它們來自胎牛血清和新生牛血清。胰酶如果是豬來源的，那么也可能存在豬鼻支原體。

支原體在實驗室內(nèi)的擴散來源

McGarrity設(shè)計了一個模型，來發(fā)現(xiàn)支原體是如何在超凈臺里的細胞傳代過程中發(fā)生傳播的。他先故意用支原體感染細胞。在超凈臺中，用胰蛋白酶消化該污染的細胞后發(fā)現(xiàn)，活的支原體可從細胞培養(yǎng)瓶外的細胞計數(shù)板、移液器、廢棄盤中被技術(shù)員分離出來。即使過了四至六天，活的支原體仍然可以存在于超凈臺表面，可被成功恢復(fù)。在超凈臺里，傳代完被支原體污染的細胞后，再傳代干凈的不含支原體的細胞，結(jié)果仍然在6周后被檢測出支原體陽性。這些結(jié)果表明，支原體的傳播是多么的快速和容易！它也警告我們，要zui大限度的避免支原體的污染，因為一瓶細胞發(fā)生污染，就會帶來支原體傳播的可能。

未真正消毒的耗材、培養(yǎng)基和溶液

不恰當(dāng)?shù)南緦?dǎo)致污染的另一個原因。高壓鍋或干熱烤箱中堆積太多的物品造成加熱不均，使一小部分耗材未得到消毒。滅菌循環(huán)時間過短是另一個消毒上犯的錯誤，特別是對于超過500ml的液體，或者是包含固體成分的溶液，或膠體物質(zhì)如瓊脂、淀粉等。為了實現(xiàn)無菌，滅菌材料的尺寸、質(zhì)量、性質(zhì)和體積必須始終考慮。

在無菌和無昆蟲區(qū)域存放消毒好的物品，使防止再次污染的前提。良好的無菌操作也是至關(guān)重要的。

實驗室人員

在因人導(dǎo)致的細胞支原體污染中，口腔支原體發(fā)生率zui高，它主要存在人的口咽部。發(fā)酵支原體和唾液支原體也在污染的細胞培養(yǎng)液中被檢測出來，不過發(fā)生率更低。

被支原體污染的細胞

實驗室內(nèi)細胞支原體的相互傳染，有必要對于從外源獲得的新的細胞系進行支原體檢測。一瓶細胞中的單個支原體的存在足以威脅到其他培養(yǎng)的細胞。支原體的污染能通過細胞操作產(chǎn)生的氣溶膠或液滴傳播。所以，應(yīng)一次只操作一種細胞，為每種細胞系配置單獨的培養(yǎng)基和試劑，這能避免支原體的污染。

細胞培養(yǎng)的正確操作和對新培養(yǎng)的細胞定期檢查，可以減少支原體污染的機會。