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影響質(zhì)粒DNA細胞轉(zhuǎn)染效率的原因
點擊次數(shù):267 更新時間:2024-07-02

  影響質(zhì)粒DNA細胞轉(zhuǎn)染效率因素
  
  1、質(zhì)粒大小和轉(zhuǎn)染量:在一般情況下,隨插入片段長度的增加轉(zhuǎn)染效率降低;而轉(zhuǎn)染效率在一定的范圍內(nèi)與質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量呈正相關。
  
  2、DNA質(zhì)量:高質(zhì)量的DNA對于轉(zhuǎn)染的效率至關重要。如果質(zhì)粒不純會顯著影響轉(zhuǎn)染復合物的形成,進而影響轉(zhuǎn)染效率。因此,可以選擇提取純度較高的試劑盒對DNA進行提取和純化,以得到更高質(zhì)量的DNA,從而提高轉(zhuǎn)染效率。
  
  3、轉(zhuǎn)染試劑的選擇:轉(zhuǎn)染試劑將外源核酸片段導入細胞,影響內(nèi)源基因表達水平。在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑,例如在綿羊成纖維細胞轉(zhuǎn)染過程中FuGene HD的轉(zhuǎn)染效率更高,GenEscortTM I對小鼠膠質(zhì)細胞則具有更好的轉(zhuǎn)染效果。總之,可以遵循高效、低毒等原則進行選擇。
  
  4、質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑比例:在一定范圍內(nèi),轉(zhuǎn)染效率與質(zhì)粒/轉(zhuǎn)染試劑比值成正相關,但毒性也會增加。可以根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑推薦比例確定合適的合適的轉(zhuǎn)染比例。
  
  5、細胞狀態(tài):維持細胞生長及健康旺盛是提高轉(zhuǎn)染效率的重要條件。建議選擇對數(shù)生長期的細胞為佳,此時期的細胞生長旺盛,可能得到更高的轉(zhuǎn)染效率,切勿選擇傳代次數(shù)過多,基因型可能發(fā)生改變的細胞。
  
  6、細胞密度:細胞密度過高或過低都會影響轉(zhuǎn)染效果,過高則難以轉(zhuǎn)染,過低則容易導致細胞死亡,因此需要選擇合適的細胞融合密度進行轉(zhuǎn)染,一般來說細胞密度在60%-80%時轉(zhuǎn)染較為理想,但具體密度可參考轉(zhuǎn)染試劑的說明書進行操作。
  
  7、血清:血清中含有大量的蛋白質(zhì),可能會降低轉(zhuǎn)染效率。一般的轉(zhuǎn)染試劑會要求轉(zhuǎn)染時使用無血清培養(yǎng)基進行轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染完成后更換wan全培養(yǎng)基。但現(xiàn)在有些新的轉(zhuǎn)染試劑血清的存在已不造成威脅,甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率,如陽離子聚合物等。
  
  8、抗生素:抗生素,如青mei素和鏈mei素,一般是作為培養(yǎng)基中的添加物來防止細胞污染。這些抗生素對于真核細胞沒有毒性,但是轉(zhuǎn)染時有些轉(zhuǎn)染試劑增加了細胞的通透性使抗生素進入細胞,可能會間接導致細胞死亡,從而降低轉(zhuǎn)染效率??梢愿鶕?jù)轉(zhuǎn)染試劑的要求來選擇是否在培養(yǎng)基中添加抗生素。
  
  質(zhì)粒DNA細胞轉(zhuǎn)染注意事項
  
  線性化還是超螺旋會影響轉(zhuǎn)染結(jié)果:超螺旋質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率比線性DNA高得多,特別是瞬時轉(zhuǎn)染。而線性化DNA轉(zhuǎn)染的整合幾率高。質(zhì)粒太大了轉(zhuǎn)染會困難一些。畢竟,相對致密、較小的外源異物被細胞內(nèi)吞的幾率要大一些。
  
  如果你的質(zhì)粒正好比較大,又沒有經(jīng)驗,選擇特別注明可以轉(zhuǎn)大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染試劑成功幾率會高一些。有的轉(zhuǎn)染試劑還會提供一些促進DNA凝聚的成分,使得DNA形成轉(zhuǎn)染復合物時更致密一些,更容易轉(zhuǎn)染一些。純化質(zhì)粒的質(zhì)量也會影響轉(zhuǎn)染效率,一定要選擇高質(zhì)量的質(zhì)粒。

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