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革蘭氏染色配制及染色方法實驗步驟
點擊次數(shù):253 更新時間:2024-07-18

  實驗方法原理:本染色法是最基本的染色法,可使用于標(biāo)本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果將細菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性兩類。
  
  實驗步驟    
  
  一、實驗試劑:
  
  1. 結(jié)晶紫溶液:
  
  A液:結(jié)晶紫:2g,95%乙醇:20ml。
  
  B液:草酸銨:0.8g,蒸餾水:80ml。
  
  需在用前24小時將A液. B液混合,過濾后裝入試劑瓶內(nèi)備用。
  
  2. 碘液:
  
  碘:1g,dian化鉀:2g蒸餾水:300ml。
  
  出碘與dian化鉀混合并研磨,加入幾毫升水,使其逐漸溶解,然后研磨,繼  續(xù)加入少量蒸餾水至完wan全溶解,最后補足水量。
  
  也可用少量蒸餾水,先將dian化鉀wan全溶解,再加入碘片,待完wan全溶解后,加水至300ml。
  
  3. 脫色液:95%乙醇。
  
  4. 復(fù)染液:
  
  A.貯存液:沙黃:2.5g,95%乙醇:100ml。
  
  B.應(yīng)用被:A液:10ml,蒸餾水:90ml。
  
  菌片制備:染色的第一步是制作涂片。菌液涂片時,用接種環(huán)蘸取菌液點在載玻片上,標(biāo)本可直接在玻片上涂布,菌落涂片時,先取生理鹽水1滴,置玻片上,用接種針挑去菌落,在鹽水中涂布。涂片時必須注意應(yīng)輕輕操作。猛烈的動作會改變菌細胞原有的排列形式,或造成細菌鞭毛脫落,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。制備的涂片應(yīng)自然干燥,并經(jīng)火焰固定,固定溫度不易過高,以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn),否則可能使細胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進行染色。
  
  二、染色方法:
  
  l. 涂片經(jīng)火焰固定,加結(jié)晶紫液染1min,清水沖去染液。
  
  2. 加碘液染1min,水洗。
  
  3. 加脫色液,不時搖動約30秒,至無紫色脫落為止,水洗。
  
  4. 加復(fù)雜液,染30秒,水洗。
  
  5. 干后鏡檢。

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